三叶青的组织培养与快速养殖研究

    关键词 三叶青 组织培养 快速养殖
    三叶青又名有角乌蔹莓、石老鼠，为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤。主要分布于长江以南地区，但多年来三叶青被毁灭性挖取，种源稀少。笔者应用组织培养进行快速养殖研究，以期解决资源紧缺问题。

    1材料
    1.1药材：试验材料采自安徽省，外植体取茎尖、带腋芽的茎段和叶片。
    1.2培养基：基本培养基为M S按不同处理方案添加不同类型的植物激素，用0.1N NaOH和0.1N HCL调节pH值为5.8~6.0，在高压灭菌锅中高温(121℃)灭菌20min。上述培养基均加3％蔗糖、1％琼脂，培养室温度25℃左右，每天光照13h，光照强度2000 1x左右。移栽基质经过灭菌消毒处理，按m(珍珠岩)：m（草炭）：m（菜园土）=1∶1∶1比例混合。
    2试验方法与结果
    2.1样品处理：取茎尖、茎段（带芽）和叶为外植体，按下列程序进行消毒：
    取材→自来水粗洗→5％洗衣粉水溶液漂洗5min→自来水冲洗30min→75％乙醇擦洗表面→0.1％升汞溶液中消毒5min→2％次氯酸钠溶液中消毒20min→无菌水冲洗4~6次，然后在无菌工作台中将外植体切成0.5~1.0cm长的小段。
    2.2诱芽培养：分别将不同部位的外植体接种到表1各培养基中，观察出芽情况，计算诱芽率。
    不同植体对愈伤组织诱导不一样，在由3号培养基的激素浓度配比下试验结果（见表2）。
    2.3继代增殖：将诱导出来的愈伤组织及芽丛转到新的3种不同激素组合的培养基上进行继代培养。将初代培养的芽丛分离并切割成2cm的茎段，接种于培养基MS+NAA 0.2；MS+6?BA 0.02+NAA 0.5；MS+6?BA 2+NAA 0.2。接种后给予全天光照，室温20~28℃。1周后腋芽萌动且萌蘖生长很快。
    2.4生根培养：不同激素组合对其生根状况影响较大(表4)。将诱导成活的丛生芽切割成单芽，分别转接到表3各培养基中(每瓶接1个芽)，30 d后4号培养基的生根率最高达74%。
    2.5移栽定植：芽长到3~4cm时，切取健壮的植株转到生根培养基上，所有的植株都能正常生长，培养1周后，即诱导出根，10d后每株可长出3～5条根，根长达4～5cm。再培养1周，植株健壮，叶色浓绿，然后揭去纸盖练苗。轻轻洗去根部培养基，移到蛭石的小盆中，盖上塑料膜及烧杯，保持较高的温度，10d后揭去塑料膜及烧杯，可移栽到大田，小苗成活率95％。
    3小结
    对三叶青不同部位的外植体进行诱导，在相同消毒处理下和同种培养基中，最佳诱导外植体为茎尖。初代培养过程中以3号培养基为最佳,生根培养基以4号为最佳。6?BA在三叶青的继代培养中的作用可以忽略不计，可以认为MS+NAA 0.2是最佳组合的继代增殖培养基。