2.1试验材料
试验材料均于5月份采集孢子囊即将成熟但未散落的孢子叶,将孢子叶抖落于白纸上或剪下装入纸袋中,自然后熟干燥1-2d,收集孢子粉。
2.2试验方法
由于通过常规愈伤组织途径很难诱导出愈伤组织,本试验仅利用孢子萌发途径探讨紫萁的组织培养技术。
采用以下两种方式:
a.取孢子囊完好的孢子叶小叶流水冲洗,于70%酒精和0.1%升汞溶液中浸泡,无菌水冲洗数次,切成0.5~1cm的小段,接种子附加不同激素的MS和1/2MS培养基上,于25+2℃,光照(40umol/s/m2,12h/d)培养,30d后按下式计算孢子萌发率:
萌发率=孢子囊变绿并长出原叶体的孢子叶块数/接种的孢子叶块数×100%
b.将后熟散落的孢子粉于水杯中搅拌后静置数分钟,弃上层液和杂质,除去底部沉淀,再在经高温灭菌的漏斗滤纸中,用70%酒精和0.1%升汞分别过滤,达到时间弃去上层多余的消毒液,无菌水浸洗数次,涂布于1/2MS培养基上。
以上所有基本培养基均添加2.0%蔗糖+0.6%琼脂粉+200mg/LKH2P04+0.2%活性炭,pH=5.8。每次结果重复三次取平均值。